Диагностика ВИЧ

Какие задачи выполняют лаборатории Центров СПИД

1.Какие задачи выполняют лаборатории Центров СПИД?

В функции лабораторий входят следующие основные задачи:

  • Диагностика ВИЧ-инфекции
  • Контроль (мониторинг) эффективности лечения, предоставляемого лицам, живущим с ВИЧ (ЛЖВ)
  • Диагностика лекарственной устойчивости ВИЧ

Диагностика ВИЧ-инфекции – это процесс, который включает серию лабораторных тестов с обязательным использованием различных диагностических тест-систем и методов. Необходимость проведения серии тестов связана прежде всего с тем простым фактом, что  сегодня не существует идеального метода, гарантирующего абсолютно точное разделение инфицированных пациентов от неинфицированных лиц. Максимально достоверные данные достигаются комбинацией нескольких тестов (методов), одни из которых лучше выявляют ВИЧ-инфицированных пациентов, а другие - лучше идентифицируют неинфицированных. На первом этапе лаборатории используют наиболее чувствительные тест-системы последнего (четвертого) поколения. Вероятность ложноотрицательного результата при использовании данных тест-систем крайне мала, поэтому при получении отрицательного результата Центры СПИД немедленно выдают заключение: Антител к ВИЧ не обнаружено.

Вместе с тем, положительный результат не является абсолютно точным доказательством наличия ВИЧ-инфекции. В Казахстане общая распространенность ВИЧ-инфекции довольно низка(<0,05%). Вероятность обнаружения ВИЧ-инфицированного пациента среди общего населения меньше, чем вероятность получения ложноположительного результата (допустимый лимит - 2%). Поэтому положительный результат требует подтверждения. Для этого лаборатории Центров СПИД проводят дополнительные тесты, которые позволяют «отсеивать» истинно-положительные результаты от ложноположительных. На последнем этапе используется иммуноблот - тест, который гарантирует максимальную надежность положительных результатов. На основании данного результата врачи могут вынести окончательное заключение о наличии у пациента ВИЧ-инфекции.

Мониторинг эффективности антиретровирусной терапии. В Казахстане лица, живущие с ВИЧ, получают бесплатное лечение в виде антиретровирусной терапии (АРТ). Эффективность АРТ очень сильно зависит от ряда факторов: соблюдение режима приема лекарственных препаратов, первичной устойчивости вируса к тому или иному препарату, или скорости возникновения мутантных устойчивых форм. Поэтому все ЛЖВ, получающие АРТ, проходят регулярное обследование в лабораториях областных и городских центров СПИД на количественное определение РНК ВИЧ (вирусная нагрузка) и количественное определение уровня CD4+/CD8+ Т-лимфоцитов.

Тест на вирусную нагрузку позволяет определить насколько эффективно лекарственные препараты подавляют размножение вируса. А тест на CD4+/CD8+ Т-лимфоциты показывает состояние иммунитета пациента. Если вирусная нагрузка находится на низком уровне, а количество CD4+клеток растет, значит выбранная схема лечения эффективна. Если нет, то необходимо внести соответствующие коррективы.

Диагностика лекарственной устойчивости ВИЧ. Проблема возникновения лекарственной устойчивости ВИЧ является неизбежной при внедрении широкомасштабной программы лечения ЛЖВ. В случае, когда терапия оказывается неэффективной, и это не связано с приверженностью пациента к лечению, на базе РЦ СПИД проводятся исследования по выявлению и генотипированию мутантных форм вируса. Эти исследования позволяют установить, какие препараты уже не могут подавлять размножения вируса, и таким образом, скорректировать схему лечения.

2.Что такое иммуноблот и почему мы можем доверять его положительным результатам?

Вирус иммунодефицита человека состоит из ряда белков (антигенов), к каждому из которых у инфицированного пациента вырабатываются специфические антитела. В отличие от тестов, выполняемых на первых этапах (ИФА, ИХЛА, экспресс-тесты), иммуноблот может определять к каким конкретно антигенам ВИЧ у пациента есть антитела.

Согласно критериям Всемирной Организации Здравоохранения (ВОЗ), положительный результат может быть установлен при обнаружении антител как минимум к двум из трех поверхностных белков вируса (gp). Поэтому использование иммуноблота сводит к минимум вероятность ложноположительных результатов.

 

Рис. 1. Пример иммуноблота

gp160, gp120, gp41, p66, p24, p17 –белки вируса. Появление на тест-полоске темной поперечной черты свидетельствует о присутствии в организме пациента антител к данному белку.Пример иммуноблота

Существует два типа иммуноблота. Первый, так называемый Вестерн-блот, производится из белков настоящих, но предварительно разрушенных вирусов, выращиваемых в культуре клеток. Преимуществом Вестерн-блота является то, что в нем присутствуют все белки ВИЧ, и мы можем увидеть полную картину, происходящего в организме пациента процесса генерации специфических антител. Однако использование дорогостоящей культуры соответственно сказывается на цене данного теста. Второй тип иммуноблота - линейный иммунный тест, был разработан с целью удешевления подтверждающего анализа. В линейных иммунных тестах используются рекомбинантные (искусственно созданные) белки. Поскольку в тестах данного типаотсутствует ряд белков ВИЧ, мы получаем фрагментарную картину. Так, например в линейных иммунных тестах отсутствует белок gp160 - один из трех поверхностных белков, на основании которых выносится окончательное решение, что делает данный тест менее информативным. Поэтому Вестерн-блот остается на сегодня «золотым стандартом»для подтверждения диагноза ВИЧ-инфекции.

3.Насколько надежны отрицательные результаты иммуноблота?

В силу недостаточной чувствительности (по сравнению с ИФА, ИХЛА или экспресс-тестами), к отрицательным результатам иммуноблота необходимо относится с осторожностью. Поэтому при получении отрицательного или неопределенного результата иммуноблота Центры СПИД предписывают пациенту пройти повторное обследование через две недели. Как правило, этого периода достаточно, чтобы организм пациента выработал в достаточном количестве антитела к основным белкам вируса. Однако в некоторых случаях этот процесс может растянуться на несколько месяцев, поэтому пациента могут пригласить пройти обследование еще несколько раз, вплоть до окончательного установления или исключения диагноза ВИЧ-инфекции.

4.Как обеспечивается безопасность донорской крови?

Скрининг доноров крови на ВИЧ (т.е. обязательное обследование каждой кроводачи, каждого донора) осуществляется не региональными СПИД, а центрами крови. При этом используются методы ИХЛА/ИФА четвертого поколения, позволяющие одновременно выявлять вирусный антиген и антитела к ВИЧ. Кроме того, образцы крови проходят обследование с использованием метода полимеразной цепной реакции (на Рис. 2 обозначена как NAT – nucleicacidamplificationtechnology, англ.), позволяющим обнаруживать РНК ВИЧ уже на 10 день после инфицирования. До этого момента ВИЧ-инфекция не определяется никакими тестами.

Рис. 2. Выявление ВИЧ-инфекции с помощью тестов различных форматов и поколений в процессе естественного течения инфекции.Выявление ВИЧ-инфекции с помощью тестов

При получении положительного результата любого из тестов, потенциально инфицированная донорская кровь подвергается уничтожению, а сам донор отстраняется от возможности сдавать кровь в дальнейшем. При этом диагноз ВИЧ-инфекции донору без проведения подтверждающих исследований не ставится. Для постановки окончательного диагноза образец крови донора направляется в РЦ СПИД для проведения дальнейших исследований согласно утвержденного алгоритма тестировния на ВИЧ инфекцию.

5.Как в Казахстане осуществляется диагностика на ВИЧ-2?

Согласно имеющимся эпидемиологическим данным на территории СНГ на сегодня не зарегистрировано ни одного случая ВИЧ-2 инфекции. Тем не менее, во всех лабораториях региональных центров СПИД Казахстана и центров крови используются тест-системы, способные одновременно выявлять как ВИЧ-1, так ВИЧ-2 инфекцию. Кроме того, большая схожесть строения вирусов первого и второго типа обеспечивает перекрестную реакцию в иммуноблоте на стадии подтверждения. При подозрении на ВИЧ-2 инфекцию в распоряжении лаборатории РЦ СПИД имеется соответствующий иммуноблот для выявления специфически антител к вирусу иммунодефицита человека второго типа.

6.Сколько стоит тест на ВИЧ?

Согласно тарифов на медицинские услуги в рамках гарантированного объема бесплатной медицинской помощи, утвержденных приказом Министерства здравоохранения РК, стоимость исследования на ВИЧ составляет 1413,99 тенге.

7.Могут ли частные медицинские организации выполнять исследования на ВИЧ?

В целях широкого доступа населения к тестированию на ВИЧ-инфекцию, медицинские организации всех форм собственности могут проводить первый этап лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции. При этом Министерством здравоохранения будут предусмотрены квалификационные требования и обязательность предоставления статистической отчетности.

Пресс-служба РЦ СПИД